Αρχές σύνθεσης νουκλεϊκών οξέων

Η σύνθεση νουκλεϊκού οξέος πραγματοποιείται με τη μέθοδο του τριγλυκεριδίου σιαλικού αμιδίου στερεάς φάσης, όπου το 3' άκρο του DNA ακινητοποιείται σε υπόστρωμα στερεάς φάσης και προστίθενται νουκλεοτίδια στην κατεύθυνση 3' έως 5' μέχρι να συντεθεί το επιθυμητό θραύσμα DNA .Αυτό διαφέρει από τη σύνθεση DNA με την εφαρμογή DNA πολυμεράσης.

Το 3' άκρο της πρώτης βάσης ακινητοποιείται στο CPG κατά τη διάρκεια της σύνθεσης, το 5'-ΟΗ της επόμενης βάσης προστατεύεται με δι-π-τολυλ τριτυλ DMT, η αμινομάδα στη βάση προστατεύεται με βενζοϊκό οξύ και το 3' Το -ΟΗ στη συνέχεια ενεργοποιείται με μια αμινοφωσφορική ένωση.1 βάση από τα 5 5'-ΟΗ της 1 βάσης και 3'-ΟΗ της επόμενης βάσης σχηματίζουν ένα τριγλυκερίδιο φωσφορώδους άλατος, το οποίο στη συνέχεια οξειδώνεται με ιώδιο σε ένα φωσφορικό τριγλυκερίδιο, το προστατευτικό στη δεύτερη βάση 5'-ΟΗ απομακρύνεται με Προσθέτοντας διχλωροξικό οξύ DM κυκλώνει μέσω της προσθήκης της επόμενης βάσης και μετά τη σύνθεση αφαιρείται το προστατευτικό στο 5'-ΟΗ με ένα ασθενές οξύ. με συμπυκνωμένο υδροξείδιο του αμμωνίου υπό θέρμανση, το υδροξείδιο του αμμωνίου απομακρύνεται, το θραύσμα ξηραίνεται υπό κενό και το νουκλεϊκό οξύ καθαρίζεται με υγρή χρωματογραφία ή PAGE.

Βήματα Σύνθεσης Ολίγο

Αποφράξεις

οΗ ομάδα προστασίας DMT 5 άκρου αφαιρείται με την προσθήκη διαλύματος TCA.

Δραστηριοποίηση

Ανάμιξη του ενεργοποιητή με το μονομερές ολιγονουκλεοτιδίου για να σχηματιστεί το ενεργό ολιγονουκλεοτιδικό μονομερές ενδιάμεσο.

Σύζευξη

Η 5-τερματική ομάδα υδροξυλίου αντιδρά με το ενεργό ολιγονουκλεοτιδικό ενδιάμεσο σε μια αντίδραση αντιπαραγωγικής συμπύκνωσης για να σχηματίσει έναν ασταθή δεσμό τριγλυκεριδίου φωσφορώδους άλατος.

Κάλυψη 

Η προσθήκη ενός παράγοντα κάλυψης εκτελεί μια αντίδραση κάλυψης ακετυλίωσης με περίσσεια υδροξυλομάδων που δεν εμπλέκονται στην αντίδραση συμπύκνωσης.

Οξείδωση 

Η προσθήκη διαλύματος ιωδίου που περιέχει νερό αντιδρά με ασταθείς δεσμούς φωσφορώδους άλατος με οξείδωση για να σχηματίσει σταθερούς δεσμούς τριγλυκεριδίου φωσφορικού οξέος.

Διάσπαση κυανοαιθυλίου

Το προϊόν νουκλεϊκού οξέος μετά τη σύνθεση, με την προσθήκη διαλύματος DEA για την απομάκρυνση της ομάδας κυανοαιθυλίου από τον φωσφορικό τριγλυκεριδικό δεσμό.

Cleaved&Deprotection

Τα θραύσματα νουκλεϊκού οξέος αποκόπτονται από τον φορέα στερεάς φάσης προσθέτοντας ένα πυκνό διάλυμα υδροξειδίου του αμμωνίου και στη συνέχεια θερμαίνονται για να απομακρυνθούν οι προστατευτικές ομάδες από τους δεσμούς υδρογόνου των βάσεων.